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影響滅菌效果的因素
1、環境因素對耐熱性的影響：環境因素會在形成芽孢的過程中影響孢子的耐熱性，包括水分、pH、離子以及芽孢是否處于包藏態等。
2、真空度：飽和蒸汽冷凝時會釋放出潛熱傳遞給被滅菌物品，加速了微生物的死亡。如果滅菌器的真空度不夠，空氣排出不完全而混在蒸汽中，在相同的壓力下其溫度會低于飽和蒸汽，混入的空氣越多溫度越低，無法達到滅菌的溫度要求。
3、 蒸汽質量：蒸汽質量除了與蒸汽的飽和度相關還由干燥度決定。過濕的蒸汽含液態水過多，導致不飽和蒸汽的產生，釋放潛熱少并可能產生濕包；過干的蒸汽不含液態水，在獲得能量后變為過熱蒸汽而非飽和蒸汽，穿透性差，滅菌效果不好。
4、滅菌物品的裝載：裝載時要求待滅菌物品在滅菌車層碼放好，裝載量要少于滅菌器容量的80%，保證每個包裹周圍要留有空隙，避免重疊，利于蒸汽流通擴散。
使用脈動真空滅菌器時對滅菌物品的要求及注意事項
1、 物品器械必須洗滌處理后進行滅菌。
2 、器械包和物品包體積不得超過30×30×50cm。
3 、物品包捆扎不宜過緊，外用化學指示膠帶貼在包外，包內放包內化學指示卡。
4 、裝填里不得超過柜室容積的99%，同時又不得小于柜室容積的5%，以防止“小裝量效應”，殘留空氣影響滅菌效果。
5 、鋁飯合與搪瓷合，不得用于裝放滅菌物品，應用帶通氣孔的器具裝放，以免響滅菌效果，以及熱氣因無法排除而令合內潮濕，無法熾干。
6、 所消物品均應打包，有蓋方合應用包布包好，否則既影響美觀，又容易碰翻造成污染。
脈動真空滅菌器原理
利用飽和蒸汽在冷凝時釋放出大量潛熱的物理特性，使待滅菌的物品處于高溫和潮濕的狀態，經過一段時間的保溫從而達到滅菌的目的。利用的是高溫飽和蒸汽穿透力強的特性。
為了保證物品無菌,脈動真空滅菌器廣泛應用于醫療衛生及工業領域。在實驗動物的飼養生產單位，脈動真空滅菌器運用飽和蒸汽在冷凝時釋放大量潛熱達到滅菌目的，被公認是滅菌能力強，高效可靠，操作方便，在實驗動物屏障設施中應用廣泛的滅菌設備。《GB14925-2010實驗動物環境及設施》中要求:屏障環境應嚴格控制人員,物品和空氣的進出。其中耐高溫潮濕物品必須要經過雙扉式脈動真空滅菌器滅菌后進入屏障環境。這對SPF級實驗動物的質量保證是至關重要的.對滅菌機理及滅菌設備基本原理缺乏了解會對滅菌設備的正確使用，日常維護及常規監測等維持動物SPF級別的重要環節造成諸多不利因素，難以保證滅菌效果。
