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LLC-LUC

LLC-LUC(小鼠Lewis肺癌細胞)產品基本信息：

細胞名稱：LLC-LUC(小鼠Lewis肺癌細胞)

種屬來源：小鼠

組織來源：肺

細胞形態：上皮細胞樣

生長特性：半貼壁生長

培養基:：90% DMEM+10% FBS+PS

生長條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳;溫度：37℃

傳代方法：1:2至1:3，每周 3次

凍存條件：無血清凍存液，液氮儲存

支原體檢測：無

注：該細胞puro藥篩濃度為1.0ug/ml，培養過程中可不用再添加puro，如若擔心抗性隨著傳代時間降低，可定期用0.5ug/ml濃度puro維持。

細胞培養操作：

1) 復蘇細胞：將含有1 mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2)細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

a、收集細胞培養上清：抽出瓶中的培養基和懸浮的細胞1000rpm離心5分鐘，棄去上清，細胞重懸后接種到新的培養瓶中(加入按照說明書細胞培養條件新配制的*培養基)。

b、剩下貼壁的細胞，用不含鈣、鎂離子的PBS輕輕潤洗細胞1次。

c、加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中，使消化液浸潤所有細胞，將培養瓶置于37℃培養箱中消化1 -2min(視細胞情況而定)，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。

d、按3mL/瓶補加培養基，輕輕打勻吹下細胞后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養液后吹勻。

e、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養基的新皿中或者瓶中，置于培養箱中培養中。(傳代建議一個滿的T25傳一個10cm或者2個T25)。

3)細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例;

a、收集細胞及細胞培養液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心5 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進行細胞計數。

b、根據細胞數量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標識。

c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

培養注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養液是否有漏液、渾濁等現象，若有上述現象發生請及時和我們聯系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態、所用培養基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養條件一致，若由于培養條件不一致而導致細胞出現問題，責任由客戶自行承擔。