• 產(chǎn)品貨號(hào):4163
  檢測(cè)范圍:
• 產(chǎn)品規(guī)格:25管/24樣
  保存溫度:2-8°
• 目錄價(jià)：￥2000
  

結(jié)合態(tài)淀粉合成酶（GBSS）活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)

注意：本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng)，請(qǐng)注意并嚴(yán)格按照該說(shuō)明書(shū)操作。貨號(hào)：4163

規(guī)格：25T/24S、50T/48S

產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系工作人員。

溶液的配制：

1、 試劑四：臨用前每支加入 5 mL 試劑一。

2、 試劑五：臨用前每支加入 8 mL 試劑一。

3、 試劑六：臨用前取 1 支加入 208 μL 雙蒸水，充分溶解備用，用不完的試劑 4℃保存。

4、 試劑八：每支臨用前加入溶解好的 4 mL 試劑四。

5、 反應(yīng)液Ⅰ的配制：臨用前在試劑二中加入 7 mL 試劑一，緩慢加熱，逐漸升溫使其溶解，冷卻后加入試劑三混合溶解，這樣可以分兩批配制并且測(cè)定。

產(chǎn)品說(shuō)明： 產(chǎn)品說(shuō)明：

GBSS（EC 2.4.1.21）以束縛態(tài)存在于淀粉體中，催化淀粉鏈的加長(zhǎng)反應(yīng)，主要負(fù)責(zé)直鏈淀粉的合成。

GBSS催化ADPG與淀粉引物(葡聚糖)反應(yīng),將葡萄糖分子轉(zhuǎn)移到淀粉引物上，同時(shí)生成ADP；進(jìn)一步通過(guò)反應(yīng)體系中添加的丙酮酸激酶、己糖激酶和6-磷酸葡萄糖脫氫酶依次催化NADP+還原為NADPH，其中NADPH生成量與前一步反應(yīng)生成的ADP數(shù)量呈正比，通過(guò)340nm下測(cè)定NADPH的增加量，可以計(jì)算GBSS活性。

注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者

增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。

需自備的儀器和用品：

紫外分光光度計(jì)、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL石英比色皿、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。

操作步驟：

一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）

稱取約 0.1g 組織加入 1mL 提取液，冰浴中勻漿。10000g ，4℃離心 10min，棄上清，在沉淀中加入 1mL 提取液充分混勻，置冰上待測(cè)。

二、測(cè)定步驟

1、 分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至340nm，蒸餾水調(diào)零。

2、 在EP管中按順序加入下列試劑

混勻后立即在 340nm 波長(zhǎng)下記錄初始吸光度 A1 和 2min 后的吸光度 A2，計(jì)算 ΔA=A2-A1。

注意：試劑二如有沉淀，加入之前要使之充分溶解混勻。三、GBSS 活性計(jì)算

1、按樣本蛋白濃度計(jì)算：

單位的定義：每mg組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生1nmol NADPH定義為一個(gè)酶活力單位。GBSS活性（U/mg prot）=[ΔA÷（ε×d）×V測(cè)]÷(Cpr×V樣÷V反總×V上清) ÷T =43.2×ΔA÷Cpr

此法需要自行測(cè)定樣本蛋白質(zhì)濃度。

2、按照樣本質(zhì)量計(jì)算：

單位的定義：每g組織在反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生1nmol NADPH定義為一個(gè)酶活力單位。GBSS活性（U/g 質(zhì)量）=[ΔA÷（ε×d）×V測(cè)]÷(W÷V提取×V樣÷V反總×V上清) ÷T=43.2×ΔA÷W

V測(cè)：測(cè)量體積，0.78mL；V反總：反應(yīng)體積，0.62mL；V提取：加入提取液體積，1mL；T：反應(yīng)時(shí)間，20min；ε： NADPH消光系數(shù)，6.22×10-3mL/(nmol_˙cm)；d：石英比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本的量，0.2mL；V上清：吸取上清液的量，0.45mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g。