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聚丙烯酰胺凝膠電泳是以聚丙烯酰胺凝膠作為支持介質(zhì)的電泳方法。在這種支持介質(zhì)上可根據(jù)被分離物質(zhì)分子大小和分子電荷多少來(lái)分離。 聚丙烯酰胺凝膠有以下優(yōu)點(diǎn)： ①聚丙烯酰胺凝膠是由丙烯酰胺和N，N’甲叉雙丙烯酰胺聚合而成的大分子。凝膠有 格子是帶有酰胺側(cè)鏈的碳-碳聚合物，沒(méi)有或很少帶有離子的側(cè)基，因而電滲作用比較小，不易和樣品相互作用。 ②由于聚丙烯酰胺凝膠是一種人工合成的物質(zhì)，在聚合前可調(diào)節(jié)單體的濃度比，形成 不同程度交鏈結(jié)構(gòu)，其空隙度可在一個(gè)較廣的范圍內(nèi)變化，可以根據(jù)要分離物質(zhì)分子 的大小，選擇合適的凝膠成分，使之既有適宜的空隙度，又有比較好的機(jī)械性質(zhì)。
一 般說(shuō)來(lái)，含丙烯酰胺7-7.5%的凝膠，機(jī)械性能適用于分離分子量范圍不1萬(wàn)至100萬(wàn)物 質(zhì)，1萬(wàn)以下的蛋白質(zhì)則采用含丙烯酰胺15-30%的凝膠，而分子量特別大的可采用含 丙烯酰胺4%的凝膠，大孔膠易碎，小孔膠則難從管中取出，因此當(dāng)丙烯酰胺的濃度增 加時(shí)可以減少雙含丙烯酰胺，以改進(jìn)凝膠的機(jī)械性能。 ③在一定濃度范圍聚丙烯酰胺對(duì)熱穩(wěn)定。凝膠無(wú)色透明，易觀察，可用檢測(cè)儀直接測(cè)定。 ④丙烯酰胺是比較純的化合物，可以精制，減少污染。合成聚丙烯酰胺凝膠的原料是丙烯酰胺和雙丙烯酰胺。丙烯酰胺稱單體，雙 丙烯酰胺稱交聯(lián)劑，在水溶液中，單體和交聯(lián)劑通過(guò)自由基引發(fā)的聚合反應(yīng)形成凝 膠。 在聚丙烯酰胺凝膠形成的反應(yīng)過(guò)程中，需要有催化劑參加，催化劑包括引發(fā)劑和 另速劑兩部分。引發(fā)劑在凝膠形成中提供始自由基，通過(guò)自由基的傳遞，使丙烯酰胺 成為自由基，發(fā)動(dòng)聚合反應(yīng)，加速劑則可加快引發(fā)劑放自由基的速度。
