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  • 發貨地:江蘇常州市
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    商品詳情

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      2. 檢查聚合酶緩沖液是否已完全解凍并充分混合。
      3. 檢查引物是否稀釋到正確的濃度。
      4. 配制新的 dNTP 溶液。dNTPs 可以被反復凍融破壞。
      5. 重新制作模板 DNA,尤其是在處理基因組 DNA 時。舊庫存可能會退化或被剪掉。
      6. 使用不同的聚合酶。如果使用校對聚合酶進行擴增有問題,我經常嘗試使用良好的舊 Taq,這通?梢越鉀Q問題。不過請記住對插入片段進行排序——如果幸運的話,不會有任何重大突變,您可以按原樣使用插入片段。否則,使用 Taq 和 1/10 濃度的校對酶的混合物重新進行 儀器,您仍應獲得相同的擴增,但錯誤率較低。
      7. 改變退火溫度。如果退火溫度太高,您顯然不會按照您想要的順序進行任何啟動。另一方面,太低的退火溫度會導致這種非特異性引發,不允許出現特定條帶。找到溫度的方法是使用梯度循環儀并以 1oC 的增量測試從引物 Tm 到低于 10oC 的范圍。
      8. 嘗試不同模板濃度的反應。您的模板濃度可能太低或制備中的雜質濃度可能太高。在 50 微升反應中嘗試 5-10 次平行反應,濃度為 10 到 200 ng。
      9. 檢查 儀器 儀——溫度和時間是否符合您的預期?
      10. 在另一臺循環儀中嘗試反應——您使用的循環儀的校準可能已關閉。
      11.嘗試添加劑。我發現 DMSO 在有問題的擴增中特別有用。
      12.重新設計引物——盡量遵守指南。

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