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組合兩種體外方法雞胚絨毛尿囊膜血管試驗(yàn)(CAMVA)和牛角膜渾濁及通透試驗(yàn)(BCOP)評(píng)價(jià)個(gè)人護(hù)理品的眼刺激,為個(gè)人護(hù)理用品的眼刺激性的體外評(píng)價(jià)提供數(shù)據(jù)支持。方法分別采用CAMVA、BCOP和Draize兔眼試驗(yàn)對(duì)45種個(gè)人護(hù)理產(chǎn)品進(jìn)行測(cè)試,并預(yù)測(cè)眼刺激分類。
CAMVA實(shí)驗(yàn):將SPF級(jí)白萊航雞胚孵育至第4天,吸取約3 ml蛋清后繼續(xù)培養(yǎng)至第14天。開(kāi)殼暴露CAM膜放置O形環(huán),取40μl(固體40 mg)不同濃度受試物直接加于環(huán)內(nèi),37℃孵育30 min后觀察血管變化,觀察陽(yáng)性反應(yīng)(充血、鬼影血管、出血等)雞胚數(shù),計(jì)算RC50(使半數(shù)雞胚出現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng)的受試物濃度)。以RC503預(yù)測(cè)產(chǎn)品無(wú)眼刺激性,RC503預(yù)測(cè)可能眼刺激性。
BCOP實(shí)驗(yàn):從屠宰場(chǎng)獲得新鮮牛眼,放入冰冷HBSS運(yùn)回實(shí)驗(yàn)室。分離并選取完好角膜裝配于支架中。培養(yǎng)箱平衡1 h,移除前室培養(yǎng)基后加入750μl受試樣品,培養(yǎng)箱孵育10 min,去除受試物,后孵育2 h。讀取角膜濁度。加入熒光素鈉溶液,孵育90 min后收集后室液體,490 nm波長(zhǎng)下讀取吸光度值。計(jì)算體外評(píng)分(IVIS)=濁度值+15x吸光度值。如IVIS≤25,預(yù)測(cè)無(wú)/弱刺激性;25IVIS值≤55,預(yù)測(cè)中度刺激性;IVIS55,預(yù)測(cè)嚴(yán)重刺激性/腐蝕性。
結(jié)果采用CAMVA法可以全部區(qū)分33種無(wú)刺激性樣品,采用BCOP法可全部區(qū)分12種刺激性樣品,其中CAMVA與體內(nèi)實(shí)驗(yàn)區(qū)分無(wú)刺激性樣品的一致性為(84.8%),BCOP與Draize試驗(yàn)區(qū)分刺激性樣品的一致性為83.3%。
CAMVA和BCOP組合可對(duì)全部樣品的眼刺激性正確分類,準(zhǔn)確性達(dá)到100%。結(jié)論 CAMVA實(shí)驗(yàn)?zāi)M結(jié)膜的損傷,對(duì)于檢測(cè)化合物的從無(wú)刺激性到中度眼刺激性效果較好,適合作為個(gè)人護(hù)理用品配方、醇類物質(zhì)和表面活性劑的篩選。
BCOP實(shí)驗(yàn)適用于檢測(cè)中度、重度和極重度眼刺激性物質(zhì),但對(duì)區(qū)分輕度到輕微水平的刺激物不太敏感。組合BCOP與CAMVA的整合試驗(yàn)策略可用于個(gè)人護(hù)理品的眼刺激評(píng)價(jià),其預(yù)測(cè)范圍可覆蓋無(wú)刺激性到嚴(yán)重刺激性。
