一、原理簡介
改進的異硫氰酸胍/酚一步法裂解細胞和滅活 RNA 酶，然后總 RNA 在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內硅基質膜，再通過一系列快速的漂洗——離心的步驟，漂洗液將細胞代謝物、蛋白等雜質去除，最后低鹽的 RNasefree water 將純凈 RNA（microRNA）從硅基質膜上洗脫。
二、試劑盒特點
1． 離心吸附柱內硅基質膜全部采用進口世界著名公司特制吸附膜，柱與柱之間吸附量差異極小，可重復性好。克服了國產試劑盒膜質量不穩(wěn)定的弊端。
2． 結合了異硫氰酸胍/酚一步法試劑穩(wěn)定性好，純度高和離心柱方便快捷的優(yōu)點，不需要異丙醇沉淀和乙醇洗滌過程，RNA 可以直接從離心柱上洗脫避免了過度干燥不易溶解問題。
3． 獨有的 MRL 裂解液配方，可以有效的消除基因組污染。
4． 多次漂洗去蛋白過程，提取 RNA 純度更高。
三、注意事項（實驗前必須首先閱讀這部分�。�
1． 為防止RNA降解，所有離心步驟如未加說明，均在4℃低溫進行。使用轉速可以達到13,000 rpm的傳統(tǒng)臺式離心機，如Eppendorf5415C 或者類似離心機。
2． 裂解液 MRL 中含有刺激性有害化合物，操作時要戴乳膠手套，避免沾染皮膚、眼睛和衣服。若沾染皮膚、眼睛時，要用大量清水或者生理鹽水沖洗。
3． 預防 RNase 污染，在實際的操作中應遵循以下指南（參見《分子克隆》）* 全程佩戴一次性手套。皮膚經常帶有細菌和霉菌，可能污染RNA的抽提并成為RNA酶的來源。培養(yǎng)良好的微生物實驗操作習慣預防微生物污染。* 使用滅菌的、一次性的塑料器皿和自動吸管抽提RNA，避免使用公共儀器所導致的RNA酶交叉污染。* 使用無 RNA 酶的非一次性的玻璃器皿或塑料器皿。玻璃器皿可以在 150°C 的烘箱中烘烤 4 小時，塑料器皿可以在 0.5 M NaOH 中浸泡 10 分鐘，用水徹底漂洗干凈后高壓滅菌備用。
4． 考慮到環(huán)保問題，本試劑盒不含有實驗室常用試劑，用戶使用前需要自備。
5． 常規(guī)的瓊脂糖凝膠電泳和變性膠電泳均可以用來分析大 RNA 的質量。好的 RNA 產物在電泳后應該可以看到明顯的二條優(yōu)勢核糖體 RNA 帶，分別為——5Kb（28S），——2Kb（18S），條帶亮度比值約為 2：1。
6． 檢測 OD260/OD280吸光度比值時，RNA 樣品應該溶于 TE 后檢測，如果用水稀釋后檢測，由于一般水離子強度和 PH 值低，會使 OD280升高，從而使比值降低。
7． 加入裂解液 MRL 勻漿后，加前，樣品可在 –60℃-70℃ 保存一個月以上。
五、操作步驟